有谁了解定位候选克隆的基本步骤？？

橘子红了TY 2021-08-17 21:49

定位候选克隆包括三个基本步骤：基因组定位、候选cDNA的获得、全长及功能分析。

基因组定位：新发展起来的，尤其在分离肿瘤易感基因中常用的方法是用PCR方法检测多样本的杂合性丢失(LOH)或纯合性丢失的高发频率区，从而获得疾病候选基因定位。开发者_JS百科

候选cDNA的获得：基因组定位提供的信息包含一定的分子标记，可用PCR或杂交的方法直接从YAC(yeastartificialchromosome)库，或从BAC(bacterialartificialchromosome)库、PAC(P1artificialchromosome)库中筛选相对应的克隆。YAC库的嵌合性严重且操作难度较大，已逐步为PAC库和BAC库取代。

全长及功能分析：获得了众多的候选cDNA后，通过筛选cDNA文库或RACE等方法克隆全长基因。

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hongrui012 开发者_如何学Go 2021-08-17 21:51

包括基因组定位、候选cDNA的获得、全长及功能分析三个步骤。近些年来，RH谱(radiation hybrid map)的建立，使染色体精细定位成为可能。这些方法比原先连锁分析的检测速度更快、精确度更高。例如L-C Tsui用连锁分析花费了大约10年的时间才把囊性纤维变性基因定位在7号染色体，而现在可能只要一年或更短的时间就可完成这项工作。

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玲妹妹Kara 开发者_StackOverflow 2021-08-17 21:53

定位候选克隆分为以下几个步骤：ａ．将致病基因定位到染色体某一区段，与定位克隆方法基本一致，可以使用连锁分析或是相关分析；ｂ．利用已知染色体遗传和物理图谱结合该区域内的基因功能、组织定位等信息寻找候选基因；ｃ．对候选基因进行表达和突变分析；ｄ．在新的家系或病例对照样本中验证候选基因的突变．如果突变被证实，进一步分析基因产物的功能并推测致病机理．其中，确定候选基因是关键步骤。

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