已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？？

山人佳燕品 开发者_运维知识库 2021-08-21 21:05

如果溶解引物的水pH过低或污染了菌或核酸酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，避免反复冻溶。建议使用10mM Tris pH7.5缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的pH值比较低（pH4-5）,引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是PCR使用材料特别是模板的质量与先前使用的不完全一致。

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ty_sea615 2021-08-21 21:24

开发者_如何转开发
首先应安排实验排除ＰＣＲ体系的问题，如纯水，模板，酶，缓冲液。
都没问题的话，应该是引物降解或污染。
可能出现问题的原因有：
1. 反复冻融
2. 在4度保存时间过长
3. 被DNA酶污染
重新找公司合成新的引物。

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