PCR过程出现假阳性，原因有哪些呢？该如何杜绝PCR出现假阳性呢？？

晚景入寒窗 2021-10-04 13:43

楼上已经把原因都说的很清楚了，针对可能造成PCR假阳性的实验操作，我们可以从以下几方面避免：
1.隔离不同操作区。PCR反应准备最好应在装有紫外灯的超净台内进行，除了操作分区外，还应注意操作器材的专用。
2.分装试剂。PCR用的去离子水和缓冲液均应高压处理。
3.严格实验操作。戴一次性手套操作，避免反应液的飞溅，用一次性吸头，吸头不要暴露于空气中，防止产物气溶胶的污染。
4.最后加样品DNA，加入DNA后盖紧EP管。
5. 在排除污染的前提下，最好的解决空白对照组中出现“假阳性开发者_JAVA百科”的办法就是把引物和酶的含量降到尽可能低，同时减少反应循环次数（但在保证阳性对照组能够出现条带的前提下）；实验器材及试剂最好全部用进口的。

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胡巴V 开发者_JAVA技巧 2021-10-04 13:45

(1)若是对照组，即无菌水空出现假阳性。建议加完9ul的mix后，先加水后加样品。避免样品浓度过高飞溅到移液枪中，从而在加水的时候进入到孔中。
(2)稀释标准品时所用的无菌水应和PCR时使用的无菌水分开，避免标准品因浓度过高进入移液器。
(3)提取样品的操作区应和PCR的操作区分开。提取样品时使用的移液器、手套等不能带入PCR操作区。

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YangHanna__ 2021-10-04 13:54

用PCR方法检测转基因成分时，经常出现假阳性、假阴性、非特异性扩增和涂抹带。尤其是假阳性和假阴性可使检测结果得出错误结论，有时可造成严重后果。造成假阳性的原因

1. 样品间交叉污染：样本污染主要有收集样本的容器被污染，或样本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有样本而造成相互间交叉污染；样本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本 间污染；

2. PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液 被PCR核酸模板污染。

3. PCR扩增产物污染：这是PCR反应中最主要最常见的污染开发者_运维问答问题。因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性。

4. 气溶胶污染：在空气与液体面摩 擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由 其造成的污染是一个值得特别重视的问题。

5. 实验室中克隆质粒的污染：由于克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力，其污染可 能性也很大。在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题比较常见。

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