醉卧香海
2021-10-16 14:14
基因敲除技术是现在的一个研究热点，我国很多科学家一直在致力于这方面的研究。中科院广州生物医药与健康研究院赖良学博士的研究团队成功利用TALEN技术在小型猪中敲除了RAG基（Recombination activating gene，重组激活基因），获得了重症联合免疫缺陷小型猪模型，该研究成果近日在线发表在免疫学专业杂志Journal of immunology上。
团队主要成员杨化强博士、黄姣博士等分别针对猪的RAG1和RAG2的外显子设计了TALEN质粒对，对猪的胎儿成纤维细胞进行转染后获得杂合和纯合的RAG1/2敲除的细胞克隆。细胞克隆用于体细胞核移植后获得27头克隆猪，其中有10头为RAG2单等位碱基缺失，9头为RAG1双等位碱基缺失，3头为RAG2双等位碱基缺失，这些碱基缺失都导致了外显子读码框移码。RAG1/2双等位敲除猪表现出了典型的重症联合免疫缺陷疾病（Severe combined immunodeficiency d开发者_如何学Cisease, SCID）特征，包括胸腺萎缩，脾脏发育不良，淋巴细胞减少，体细胞基因组V（D）J重排消失，无成熟的T、B细胞。
免疫缺陷性动物是指先天遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物，重症联合免疫缺陷疾病,即SCID小鼠被广泛运用于感染免疫、炎症、肿瘤和干细胞等相关研究。但小鼠在体型、寿命和对炎症的免疫反应机制等与人类相差较大，在疫苗的开发、药物筛选与临床评价、干细胞治疗的长期跟踪等与人类临床相关的研究中受到局限。由于猪在体型，寿命，生理指标，特别是免疫机制等与人类相近，该研究成功建立的RAG敲除的SCID小型猪模型有望在生物医药和转化医学中发挥重要作用。http://scitech.people.com.cn/n ... .html
太康县我是谁 2021-10-16 14:18
楼上表述的很全面，稍微做点补充：
基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的开发者_运维问答重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业。
曲修明 开发者_StackOverflow中文版 2021-10-16 14:20
国内首先完成的2型糖尿病模型小鼠——肝脏葡萄糖激酶基因敲除小鼠模型的诞生，表明我国科学家已经完全掌握了基因敲除动物模型这一基因工程中的较高技术操作。今后，我国学者将能够根据中国人一些特有的基因变化特点，制备更多的基因敲除或导入的重大疾病动物模型，用来研究中国人疾病的发病特点以及进行创新药物的筛选工作。同时，这些“小老鼠”的“出世”也将带动新兴产业发展，要知道，国外同类的模型动物年经济效益均能超过千万美元，有望就此开辟出一条开阔的科技产业化道路
qkoufu617445 2021-10-16 14:28
基因敲除(Gene knockout)是指借助分子生物学、细胞生物学和动物胚胎学的方法,通过胚胎干细胞这一特殊的中间环节将小鼠的正常功能基因的编码区破坏,使特定基因失活,以研究该基因的功能;或者通过外源基因来替换宿主基因组中相应部分,以便测定它们是否具有相同的功能,或将正常基因引入宿主基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗的目的。基因敲除是揭示基因功能最直接的手段之一。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用设计的同源片段替代靶基因片段(即基因打靶),从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了基因打靶技术外,近年来新的原理和技术也逐渐被应用,比较成功的有RNA干扰技术,同样也可以达到基因敲除的目的。
基因敲除技术现在以广泛的应用于各个领域并取得了快速的发展，应用此技术可以建立生物模型、培育新的生物品种、还可以用于疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗等。
1）建立生物模型的研究
基因敲除动物模型的建立，为研究人类疾病提供了一个崭新的方法，如：通过敲除小鼠的OA1基因用来研究人类眼球白化症。在药物依赖性研究中基因敲除技术也发挥了重要作用，利用基因敲除技术培育出了先天性缺失某一特定受体基因的动物用于研究该受体所发挥的作用，如：通过基因敲除技术培育出阿片μ、δ、κ三种亚型受体基因缺陷小鼠用于研究吗啡产生的精神依赖性史由什么受体介导的。
2）在培育新物种的研究
作为一项新兴的微生物育种技术，基因敲除克服了传统诱变方法的盲目性和偶然性，敲除后改变的基因会随染色体DNA进行复制，改良的菌开发者_C百科种可以稳定地用于后续的研究和生产。这样的方法具有很强的目的性，大大节省了为生物技术研究的时间。
3 ）疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗的研究
在对罗格列酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响的实验中发现，罗格列酮可以抑制动脉粥样硬化病变的发展；2010年张风河等应用敲除技术研究p75神经营养蛋白受体及印尼敲除对小鼠面神经损伤后神经再生的影响，结果发现可以增强面神经的再生。
基因敲除技术是现在的一个研究热点，我国很多科学家一直在致力于这方面的研究。中科院广州生物医药与健康研究院赖良学博士的研究团队成功利用TALEN技术在小型猪中敲除了RAG基（Recombination activating gene，重组激活基因），获得了重症联合免疫缺陷小型猪模型，该研究成果近日在线发表在免疫学专业杂志Journal of immunology上。
团队主要成员杨化强博士、黄姣博士等分别针对猪的RAG1和RAG2的外显子设计了TALEN质粒对，对猪的胎儿成纤维细胞进行转染后获得杂合和纯合的RAG1/2敲除的细胞克隆。细胞克隆用于体细胞核移植后获得27头克隆猪，其中有10头为RAG2单等位碱基缺失，9头为RAG1双等位碱基缺失，3头为RAG2双等位碱基缺失，这些碱基缺失都导致了外显子读码框移码。RAG1/2双等位敲除猪表现出了典型的重症联合免疫缺陷疾病（Severe combined immunodeficiency d开发者_如何学Cisease, SCID）特征，包括胸腺萎缩，脾脏发育不良，淋巴细胞减少，体细胞基因组V（D）J重排消失，无成熟的T、B细胞。
免疫缺陷性动物是指先天遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物，重症联合免疫缺陷疾病,即SCID小鼠被广泛运用于感染免疫、炎症、肿瘤和干细胞等相关研究。但小鼠在体型、寿命和对炎症的免疫反应机制等与人类相差较大，在疫苗的开发、药物筛选与临床评价、干细胞治疗的长期跟踪等与人类临床相关的研究中受到局限。由于猪在体型，寿命，生理指标，特别是免疫机制等与人类相近，该研究成功建立的RAG敲除的SCID小型猪模型有望在生物医药和转化医学中发挥重要作用。http://scitech.people.com.cn/n ... .html
太康县我是谁 2021-10-16 14:18
楼上表述的很全面，稍微做点补充：
基因敲入/敲除动物技术已经成为现代生命科学基础研究和药物研发领域不可或缺的开发者_运维问答重要技术，该技术从上世纪七八十年代诞生以来，至今已有近四十年的历史，经典技术如DNA原核显微注射、胚胎干细胞显微注射技术一直以来经久不衰，在小鼠模型构建方面日趋完善，并且如同剪切酶和抗体等常规分子生物学试剂的制备技术一样，逐渐从基础研究实验室转向商业模式，成为一项高度标准化的新兴产业。
曲修明 开发者_StackOverflow中文版 2021-10-16 14:20
国内首先完成的2型糖尿病模型小鼠——肝脏葡萄糖激酶基因敲除小鼠模型的诞生，表明我国科学家已经完全掌握了基因敲除动物模型这一基因工程中的较高技术操作。今后，我国学者将能够根据中国人一些特有的基因变化特点，制备更多的基因敲除或导入的重大疾病动物模型，用来研究中国人疾病的发病特点以及进行创新药物的筛选工作。同时，这些“小老鼠”的“出世”也将带动新兴产业发展，要知道，国外同类的模型动物年经济效益均能超过千万美元，有望就此开辟出一条开阔的科技产业化道路
qkoufu617445 2021-10-16 14:28
基因敲除(Gene knockout)是指借助分子生物学、细胞生物学和动物胚胎学的方法,通过胚胎干细胞这一特殊的中间环节将小鼠的正常功能基因的编码区破坏,使特定基因失活,以研究该基因的功能;或者通过外源基因来替换宿主基因组中相应部分,以便测定它们是否具有相同的功能,或将正常基因引入宿主基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗的目的。基因敲除是揭示基因功能最直接的手段之一。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用设计的同源片段替代靶基因片段(即基因打靶),从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了基因打靶技术外,近年来新的原理和技术也逐渐被应用,比较成功的有RNA干扰技术,同样也可以达到基因敲除的目的。
基因敲除技术现在以广泛的应用于各个领域并取得了快速的发展，应用此技术可以建立生物模型、培育新的生物品种、还可以用于疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗等。
1）建立生物模型的研究
基因敲除动物模型的建立，为研究人类疾病提供了一个崭新的方法，如：通过敲除小鼠的OA1基因用来研究人类眼球白化症。在药物依赖性研究中基因敲除技术也发挥了重要作用，利用基因敲除技术培育出了先天性缺失某一特定受体基因的动物用于研究该受体所发挥的作用，如：通过基因敲除技术培育出阿片μ、δ、κ三种亚型受体基因缺陷小鼠用于研究吗啡产生的精神依赖性史由什么受体介导的。
2）在培育新物种的研究
作为一项新兴的微生物育种技术，基因敲除克服了传统诱变方法的盲目性和偶然性，敲除后改变的基因会随染色体DNA进行复制，改良的菌开发者_C百科种可以稳定地用于后续的研究和生产。这样的方法具有很强的目的性，大大节省了为生物技术研究的时间。
3 ）疾病的分子机理研究和疾病的基因治疗的研究
在对罗格列酮对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响的实验中发现，罗格列酮可以抑制动脉粥样硬化病变的发展；2010年张风河等应用敲除技术研究p75神经营养蛋白受体及印尼敲除对小鼠面神经损伤后神经再生的影响，结果发现可以增强面神经的再生。
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