基因治疗中，基因转移有哪些方法？？_问答_开发者

ycgq1982 2021-10-27 12:43

基因转移是用物理的、化学的或生物学的方法将目的基因导入受体细胞并使之表达的一种技术。
物理方法
包括显微镜注射法、电脉冲介导法。显微注射法是应用特别的玻璃显微注射器在显微镜下把重组DNA导入靶细胞；电脉冲介导法又称电穿孔法，是指在高压电脉冲的作用下，使细胞膜上出现瞬间微小的孔洞，从而介导不同细胞之间的原生质膜发生融合，使外源DNA通过细膜上出现的瞬间小孔而进入细胞。
化学方法
有DNA-阳离子-二甲基亚砜法。基因转移的生物学方法包括细胞融合法、脂质体介导法、原生质体融合法等。除以上三种方法外，又出现了颗粒轰击技术，就是将外源DNA包被在金属上，在电场中包被DNA的金属颗粒获得能量并以高速度运动，穿入靶细胞组织或器官内，由于这种金属颗粒可以涂成薄膜状，所以可实现较多细胞的基因转移同时发生，改进了其它物理方法基因转移效率低的缺点。
尽管物理法、化学法及生物学法在基因转移中被广泛应用，但由于基因转移效率较低，在短时间内难以取得基因治疗所需要的108~1012个转化细胞，因而在基因治疗的应用中仍然具有一定局限性，虽然对其进行了一些改造，如颗粒轰击技术的处理和应用，但也不能完全克服以上缺点，故而在基因治疗中不得不救助于其它技术，目前被广泛应用的一种技术就是逆转病毒载体技术（RMGT）。
逆转录病毒介导的基因技术
是目前将外源基因导入细胞的最有效的方法。此系统包括重组逆转录病毒载体和包装细胞两个部分，广泛应用的逆病毒载体LNL6是以Moloney鼠白血病病毒（MO-MLV）改建的。该病毒为RNA病毒，感染细胞后，其基因组RNA经逆转产生双链DNA拷贝插入宿主染色体形成前病毒，前病毒转录产生正链即为病毒基因组RNA。整个基因组从5′端到3′端依次是：5′长末端重复顺序（LTR）编码病毒内部结构蛋白的gag基因，编码蛋白的pol基因，编码外壳蛋白的env基因以及3′LTR和一个介子5′LTR和gag基因之间的包装信号。将病毒蛋白编码区gag、pol、env全部切除，代之以外源性目的基因即改建为病毒载体，保留了LTR和包装信号，是一种复制缺陷性病毒。同时，设计一种包装细胞系，其内含有辅助病毒基因组，即为包装信号缺乏的MO-MLV。当逆转录病毒载体进入包装细胞系时，载体基因就被包装形成完整的病毒颗粒，于是包装细胞系就成了制造病毒载体开发者_开发百科的生产细胞系。将靶细胞与生产细胞系其同培养或是收集含有载体病毒的生产细胞系上清液与靶细胞一起孵育，即可有效地进行基因转移。逆转录病毒载体技术的优点在于转染谱广，可感染包括人体在内的多种动物细胞类型，一次可感染大量细胞，转染率高达100%，转染的基因可为单拷贝和少数拷贝，能准确地整合到宿主细胞基因组中，整合率高，且能长期有效地表达。

qkoufu7007 2021-10-27 12:48

开发者_开发知识库
实现基因的直接、间接转移，有很多有效的方法，如物理法、化学法、融合法以及逆转录病毒载体基因转移法等多种。但这些方法中，由于物理法、化学法以及融合法等的基因转移效率较低，在短时间内难以取得基因治疗所需要的105一101’个转化细胞，因此，在基因治疗中的实际应用受到很多限制。最近，根据颗粒轰击技术(Particlebombardmenttechnique）的原理研究的许多装置，可能提高物理基因转移方法的效率。但仍然不如逆转录病毒载体技术的基因转移效率高。

老橡树1 2021-10-27 12:50

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基因转移是指用适当手段将外源基因导入体外或体内受体细胞中的分子生物学技术。常用方法可概括为物理、化学和生物三大类，前两类是非病毒的方法，生物方法主要指病毒介导的基因转移，包括RNA病毒、DNA病毒两类，物理化学法携带的遗传物质在细胞内易受DNA酶降解，而且不容易稳定地存在细胞基因组中，但是这些方法不存在野生型病毒污染．比较安全．病毒方法的特点是基因转移效率较高，但是安全性问题需要重视。理想的基因转移方法应符合以下要求，(1)高效的转移率；(2)外源基因定向导入受体细胞，且能转导非分裂相的细胞；(3)能稳定地、定点整合到宿主染色体上．最好是同源重组；(4)较高的安全性．对人体不构成较严正重的危害；(5)容易操作．易推广应用。

u_106658883 2021-10-27 开发者_如何学Python12:51

楼上说的都很全。常用方法可概括为物理、化学和生物三大类，前两类是非病毒的方法，生物方法主要指病毒介导的基因转移，包括RNA病毒、DNA病毒两类，物理化学法携带的遗传物质在细胞内易受DNA酶降解，而且不容易稳定地存在细胞基因组中，但是这些方法不存在野生型病毒污染。比较安全．病毒方法的特点是基因转移效率较高，但是安全性问题需要重视。