巢氏PCR和普通PCR有什么区别？？_问答_开发者

罪恶的小石头 2021-05-31 13:22

普通PCR过程分为三步：
　　1.DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA
　　2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。
　　3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP为原料，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的DNA链。
　　每一循环经过变性、退火和延伸，DNA含量可增加一倍（理论上）。
巢式PCR过程分为两步：
第一步：目标的DNA模板蓝色的第一对引物结合。第一对引物也可能结合到其他具有相似结合位点的片段上并扩增多种产物。但只有一种产物是目的片断（图中未显示可能的多种产物）。
第二步：使用图中红色标记的第二套引物对第开发者_运维问答一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。
由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部，而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小，因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物几乎或者完全没有引物配对特异性不强造成的非特异性扩增的污染。

2014-06-26 2 0分享新浪微博 qq空间微信

赞同来自:许岳楷

有没有人和我一样，看成~雀巢PCR

王骁峰 2021-05-31 13:26

开发者_如何学编程
我来补充一下吧，说一下两者的定义。
普通PCR:一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性：利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟。
退火：在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引子熔点5℃。错误的黏合温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。新技术的融合型核酸聚合酶在此阶段的温度会高于熔点3~5℃，仅需时间5~10秒。
延伸：DNA聚合酶由降温时结合上的引子开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片断长度。传统的Taq估计合成1000bp大概需要1分钟、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、融合型聚合酶仅约15秒。
巢式PCR（nested PCR）：总体步骤与普通的相同，特点是先用低特异性引物扩增几个循环以增加模板数量，再用高特异性引物扩增。

季亦婷 2021-05-31 13:38

巢式PCR虽然也是扩增两次，但是跟普通的二次PCR相比，它的优势是多方面的。巢式PCR的两对引物是嵌套的，即第二对引物是在第一对引物往里的。
这点区别产生的优点很多：能够提高检测的特异性，在巢式过程中往往第一轮的PCR产物跑电泳啥都看不到，但是经过第二轮的PCR，产物就很亮了。比如检测黄瓜根际真菌，只要一个孢子，液氮碾磨，做巢式
就能检测出来。这个优点是二次PCR所不能媲美的。
另外还有一点就是从酶的角度分析，你从3kb的片段上扩1kb的序列的效率要比1kb设计引物扩增自开发者_运维技巧身高的多得多。聚合酶起作用的时候同样需要扩增起始位点的上游有一段序列，方便结合。所以说，巢式PCR在检测中的检测限要比二次PCR低的低得多，要更加灵敏。尤其是样品中目的序列的丰度较低的情况下，巢式PCR的优势就展现出来了。

M41****807 2021-05-31 13:38

开发者_运维知识库
巢式PCR相对普通PCR,其优点是：
1、克服了单次扩增“平台期效应”的限制，使扩增倍数提高，从而极大的提高了PCR的敏感性；
2、由于模板和引物的改变，降低了非特异性反应连续放大进行的可能性，保证了反应的特异性；
3、内侧引物扩增的模板是外侧引物扩增的产物，第二阶段反应能否进行，也是对第一阶段反应正确性的鉴定，因引可以保证整个反应的准确性及可行性。