脑瘤干细胞是怎么分离出来的？？

黄斯敏 开发者_如何学JAVA 2021-06-06 19:29

最经典的分离脑肿瘤干细胞的方法就是无血清培养基中的悬浮克隆球形成法 。 脑肿瘤干细胞的研究起始人 Ignatova，他利用培养神经干细胞的无血清悬浮培养法， 从原发脑肿瘤中分离出具有自我更新和分化能力的细胞，当时称为神经干细胞样细胞（neural stem－like cells）。
另外， Singh 等还首先利用 CD133 免疫磁珠分选技术（MACS）从人类脑肿瘤组织中分离出CD133 阳性和 CD133 阴性细胞，将其分别种植入OD－SCID 小鼠，发现仅 100 个 CD133 阳性细胞就可以形成肿瘤，并且其分化程度及表达的表面标志与病人原发肿瘤相似， 而种植 5～10×104 个 CD 133阴性细胞则不能致瘤。

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南呈桐 2021-06-06 19:34

肿瘤干细胞都是以预设的几个Marker表达作为标准的，检测分选都是这样。分离纯化的方法，我知道的有两种，一种是流式分选，一种是磁珠分选。流式分选需要对细胞进行荧光抗体标记，针对肿瘤干细胞的的特定marker，呈阳性的细胞可以被荧光抗体标记而用流式细胞仪分选出来。磁珠分选原理也一样，Marker阳性的细胞被带有抗体的磁珠结合，通过外加磁场进行分选。分选出的细胞在特定Buffer中，将抗体脱去，即得到肿瘤干细胞。不限于脑瘤，开发者_如何学C各种肿瘤干细胞都适用，只是选的Marker不同。

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丰甜霸道 开发者_开发问答 2021-06-06 19:50

在研究中，实体肿瘤组织是十分稀少珍贵的，所以分析方法必须高效和准确的，尽量避免浪费宝贵的样品资源。首次鉴定出脑瘤起始细胞Singh博士优化了肿瘤干细胞的鉴别和分离手段，利用流式细胞仪从脑瘤中分离出起始性干细胞，从而可以快速和有效地分析靶细胞。

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天道酬勤3NM 2021-06-06 19:53

我来补充下无血清培养基中的悬浮克隆球形成法分离脑肿瘤干细胞的具体步骤：
首先要获取原代脑肿瘤细开发者_运维问答胞，之后进行消化传代，传代后的细胞接种至第一无血清干细胞培养基中，再加入MG-132进行培养后，用第一无血清干细胞培养基进行换液，然后加入多烯紫杉醇和阿霉素进行二次培养，获得原代脑肿瘤球细胞；
再次要进行原代脑肿瘤球细胞的收集传代：将获取的原代脑肿瘤球细胞洗涤收集，再接种至第二无血清干细胞培养基（含有ESGRO) 中进行培养传代，获得最终的脑肿瘤干细胞。
该方法能抑制脑肿瘤干细胞的分化并促进其增殖分裂，获得大量高纯度脑肿瘤干细胞。

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