斑点杂交有什么应用？？

U43900****44517 2021-06-28 06:12

开发者_高级运维
斑点杂交主要是用来检测细胞基因拷贝数的变化或者mRNA含量的变化。其操作简便，提取的核酸不需经电泳和转印，直接点在支持膜上。其优点是在同一张支持膜上可以点多份样品，便于较大规模的检测和筛选。其缺点是容易出现假阳性，需要设立严格的样品对照。

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ty_阳光晒干回忆 2021-06-28 06:38

目前斑点开发者_如何转开发杂交主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测，一般有以下几个应用
DNA斑点杂交：
①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。
②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。
③用铅笔在滤膜上标好位置,将DNA点样于膜上,每个样品一般点μl(2~10μg DNA)。
④将膜烘干，密封保存备用。
RNA斑点杂交：与上法类似，每个样品至多加10μg总RNA（经酚/ 氯仿或异硫氰酸胍提取纯化 ），方法是将RNA溶于5μlDEPC水，加5μl 甲醛 /SSC 缓冲液 （10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA变性，然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上，烘干。
完整细胞斑点杂交：应用类似检测细菌 菌落的方法，可以对细胞培养物的特异序列进行快速检测，将整个细胞点到膜上，经NaOH处理，使DNA暴露、变性和固定，再按常规方法进行杂交与检测。 有人曾用此法从105个培养细胞中检测到至少5pg的Epstein-Barr 病毒 DNA。 完整细胞斑点印迹法可以用于筛选大量标本，因为它使细胞直接在膜上溶解，所以DNA含量甚至比常用的提取法还高，又不影响与32P标记的探针杂交，但它不适用于非放射性标记探针，因为DNA纯度不够，会产生高本底 。

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